磷酸缓冲液
磷酸缓冲液(PB，Phosphate Buffer)，是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，通常使用的有磷酸钠缓冲液(NaH2PO4&Na2HPO4)和磷酸钾缓冲液(K2HPO4&KH2PO4)，由于它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广。
- 中文名称 磷酸缓冲液
- 外文名称 Phosphate Buffer
- 成分 NaH2PO4&Na2HPO4
- 磷酸缓冲液 PH5.7--8.0
主要作用
PB(Phosphate Buffered)，主要用于化学实验。简称:PB或者PB缓冲液
配制方法
0.2M磷酸缓冲液
磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)
甲液:
NaH2PO4·2H2O:Mr=156.03，0.2mol/L溶液为31.21g/L，
NaH2PO4·H2O:Mr=138.01，0.2mol/L溶液为27.6g/L。
乙液:
Na2HPO4·2H2O:Mr=178.05，0.2mol/L溶液为35.61g/L，
Na2HPO4·7H2O:Mr=268.13，0.2mol/L溶液为53.624 g/L ，
Na2HPO4·12H2O:Mr=358.22，0.2mol/L溶液为71.64g/L。
磷酸缓冲液PH5.7--8.0(0.2M)
PH | 甲液X(ml) | 乙液Y(ml) | PH | 甲液X(ml) | 乙液Y(ml) |
5.7 | 93.5 | 6.5 | 6.9 | 45 | 55 |
5.8 | 92 | 8 | 7 | 39 | 61 |
5.9 | 90 | 10 | 7.1 | 33 | 67 |
6 | 87.7 | 12.3 | 7.2 | 28 | 72 |
6.1 | 85 | 15 | 7.3 | 23 | 77 |
6.2 | 81.5 | 18.5 | 7.4 | 19 | 81 |
6.3 | 77.5 | 22.5 | 7.5 | 16 | 84 |
6.4 | 73.5 | 26.5 | 7.6 | 13 | 87 |
6.5 | 68.5 | 31.5 | 7.7 | 10.5 | 89.5 |
6.6 | 62.5 | 37.5 | 7.8 | 8.5 | 91.5 |
6.7 | 56.5 | 43.5 | 7.9 | 7 | 93 |
6.8 | 51 | 49 | 8 | 5.3 | 94.7 |
根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.
1/15M 磷酸缓冲液
磷酸缓冲液PH4.49--9.18(1/15M)
PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml) PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml)
PH | 甲液X(ml) | 乙液Y(ml) | PH | 甲液X(ml) | 乙液Y(ml) |
4.49 | 0 | 10 | 6.89 | 6 | 4 |
4.94 | 0.1 | 9.9 | 7.17 | 7 | 3 |
5.29 | 0.25 | 9.75 | 7.38 | 8 | 2 |
5.59 | 0.5 | 9.5 | 7.78 | 9 | 1 |
5.91 | 1 | 9 | 8.04 | 9.5 | 0.5 |
6.24 | 2 | 8 | 8.2 | 9.7 | 0.3 |
6.47 | 3 | 7 | 8.3 | 9.75 | 0.25 |
6.64 | 4 | 6 | 8.68 | 9.9 | 0.1 |
6.81 | 5 | 5 | 9.18 | 10 | 0 |
乙液:一水磷酸二氢钠,1/15M溶液含9.2g/L
甲液:二水磷酸氢二钠,1/15M溶液含11.864g/L
根据要求的PH值,取X毫升甲液与Y毫升乙液,混合均匀即得.
缓冲范围
磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛，可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液，配制酸性缓冲液可直接用NaH2PO4或KH2PO4，pH范围在1-5;碱性缓冲液可直接用Na2HPO4或K2HPO4，pH范围在9-12;中性缓冲液则用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合，pH在5.5-8.5。
浓度计算
通常所说的磷酸缓冲液的浓度是指溶液中含有的所有的磷酸根离子的浓度，而不是钠离子(Na+)或者钾离子(K+)的浓度。正是因为如此，在配制中性缓冲液时，用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合，并不影响磷酸根离子的浓度，所得的缓冲液浓度仍是等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液原来的浓度，但是缓冲液中的钠离子(Na+)或者钾离子(K+)的浓度已经发生变化。
优缺点
磷酸缓冲液的优点:(1)易配制各种浓度的缓冲液;(2)适用的pH值范围宽，可配置各种pH值的缓冲液;(3)pH受温度影响较小;(4)缓冲能力强，缓冲液被稀释后pH变化小。
磷酸缓冲液的缺点:(1)易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀;(2)会抑制某些生化反应过程，如抑制某些酶的催化过程等。