心肌酶谱是对心肌酶检查，检查心肌酶主要是确定心肌缺血坏死或细胞膜通透性。

• 中文名称 心肌酶谱
• .血清酶总论 P232
• 学科 生物
• 命名 习惯命名法

简介

　　1.血清酶总论:P232

　　乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)，α-HBD COOH COOH

　　α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸

　　eg:转氨酶、已糖激酶、磷酸化酶

　　3.水解酶:催化底物之间发生水解反应的酶类

　　eg:淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶

　　ALP

　　对-硝基苯酚磷酸盐对-硝基苯酚+磷酸盐

　　水解

　　4.裂解酶类:催化底物移去一个基因而留下双键的反应或逆反应的酶类。

　　eg:碳酸酐酶，醛缩酶

　　5.异构酶类:催化各种同分异构体之间互相转化的酶类

　　eg:磷酸已糖激酶，消旋酶

　　磷酸已糖激酶

　　6-磷酸葡萄糖-磷酸果糖

　　6.合成酶类(连接酶类):催化两分子底物合成-分子的化合物，同时必须偶联有ATP磷酸键断裂。

命名

　　1.习惯命名法:根据酶来源，催化反应性质及底物来命名。

　　底物:淀粉酶，蛋白酶

　　性质:脱氢酶、转移酶

　　来源:胰淀粉酶、胃蛋白酶

　　底物+性质:谷草转氨酶

　　2.系统命名法:酶反应底物、性质均要列出，各底物间以":"隔开

　　编号:(1)1为氧化还原酶类

　　2为转移酶类

　　3为水解酶类

　　4为裂解酶

　　(2)反应作用的位置，即可用于哪个基因

　　1.1 -CH-OH

　　1.2 -C=0

　　1.3 -C=CH

　　1.4 -C=NH

　　1.5 -CH-NH2

　　1.6 NADH、NADPH

　　(3)

　　1.1.1 氯化还原酶 CH-OH 受体:NAD+ NADP-

　　1.1.2 氯化还原酶 CH-OH 受体:细胞色素

　　1.1.3 氯化还原酶 CH-OH 受体:分子氧

去路

　　(一)血清酶的排泄:P234

　　1.尿路:是血清中低分子量酶类主要去路

　　2.胆汁不是血清酶排泄途径

　　(二)肝或网状内皮系统对血清酶的清除:

　　肝脏对以酶原形式存在的酶类有消除作用

　　(三)酶蛋白在血管内的失活和分解:

　　(四)转入其它体液

活性单位

　　(一)酶的活性单位:在规定条件，每分钟催化1umol的基质发生转化所需要的酶量。

　　规定条件包括:温度、PH、缓冲系统、基质浓度及辅助因素

　　(二)酶的单位计算

　　1.根据标准计算:

　　(U/L)酶活力单位=A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000

　　总体积-样品+基质

　　2.根据反应底物的消光系数:

　　酶活力=A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000

　　消光系数 比色杯厚度

　　(三)血清酶的生理差异:

　　1.性别:男>女

　　2.年龄:儿童 磷酸酶>成人 婴儿 LDH 2倍成人

　　3.进食:对酶活力本身无影响，但可影响比色时的浊度

　　4.活动:

　　5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑

改变机制

　　(一)合成异常:P238

　　1.合成减少

　　2.合成增加

　　(二)酶从损伤细胞中释放增加:

　　是疾病时大多数血清酶↑的主要机制

　　(三)其它机制:

　　肾衰→尿少→ 血淀粉酶↑

　　药物，毒物可作为酶的抑制剂

　　2.AST的测定:

　　AST 谷草转氨酶(GOT)

　　天门冬氨酸氨基移换酶

　　一、AST分布:

　　广泛分布于人体各组织、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、肾、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最丰富。

　　主要存在线粒体中(M-AST)。胞浆中(C-AST)仅占12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述组织发生病变

　　时，才释放入血。

方法学

　　(一)赖氏比色法:P1151.原理:

心肌酶检测仪

　　COOH COOH COOH COOH

　　(CH2)2 + CH2 AST (CH2)2 + CH2

　　C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0

　　COOH COOH COOH COOH

　　酮戊二酸 天门冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸

　　COOH CH3

　　CH2 柠檬酸苯胺 C=0+CO2

　　C=0 脱羧 COOH

　　COOH

　　丙酮酸

　　CH3

　　C=0 + →丙酮酸-2.4- = +H2O

　　COOH 硝基苯腙

　　2.4-二硝基苯肼 酸性，草黄色，加碱，棕红色

　　与标准浓度丙酮酸生成的苯腙比色(505nm)

　　2.正常参考值:8-28u

　　3.注意事项

　　(1)溶血标本不能用于AST测定，因为RBC中AST是血清10倍。

　　(2)M-AST、C-AST理化性质，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反应，是同I酶

　　(3)赖氏比色法简易性，相对准确性，所以是普及的原因

　　(4)难以确定在酶反应期内，产物的生成与时间成正比。

　　草酰乙酸是AST竞争抑制剂，随反应进程，产物，酶反应不断。

　　(5)显色反应及底物浓度问题。

　　酮戊二酸也可与2.4-二硝基苯肼反应，产生另一棕色苯腙，使AST测定假阳性增高。

　　为了减少其干扰，波长选在490-530nm，此时丙酮酸为-酮戊二酸2倍

　　2.4-二硝基苯肼在碱性溶液中也可呈色，使吸光度伪性增高。

　　(6)A、偶联转氨作用:

　　ALT

　　丙酮酸+谷氨酸丙氨酸

　　所以肝疾病AST、ALT同时，使丙酮酸消耗，AST测定结果减低。

　　B、产物旁路

　　乳酸

　　LDH ↑NADH+H+

　　丙酮酸

　　↑

　　α-酮戊二酸+天门冬aa AST 草酰乙酸+谷aa.

　　↓MDH+NADH+H+

　　苹果酸

　　所以受LDH、MDH干扰，使AST测定结果减低

　　(二)酶偶联一些外连续监测法:

　　1.原理:L-天门冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+谷aa.

　　草酰乙酸+NADH+H+ MDH L-苹果酸+NAD+

　　340nm

　　吸光度下降值，计算AST活力

　　2.参考值:男<40u/L 37℃

　　女<35u/L 37℃

　　3.注意事项:

　　(1)采血后立即分离血清，避血溶血

　　血清与血块不可长时间设置在一起

　　(2)血清，室温4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不变

　　(3)抗凝剂血浆:

　　EDTA、2Na，肝素对AST无抑制作用

　　不能用草酸盐抗凝剂，因为可抑制AST活性

　　(4)AST浓度过高，稀释重做。

　　(5)不存在偶联转氨作用和产物旁路问题

　　(6)不存在 酮戊二酸干扰，可适当提高底物浓度使反应完全

　　(7)底物中存在谷氨酸脱氢酶(GLDH)

　　α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O

　　消耗NADH+H+，使结果伪性增高。

　　(8)轿清中丙酮酸LDH

　　丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+

　　消耗NDAH+H+，使结果偏高

　　(9)在指示酶作用有，草酰乙酸可自动脱羧生成丙酮酸，使结果偏低。应加LDH，使之成为乳酸，从而更加准

　　确反映AST活力。

　　所以MDH、LDH共同作为指示酶

　　三、临床意义:

　　1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗时6-12h↑，48h达高峰，3-5d恢复正常

　　2.急性肝炎，手术后，药物中毒，AST明显↑

　　肝Ca、慢性肝病，心肌炎，AST中度

　　肌炎，胸膜炎，肾炎，AST轻度

　　3.急性肝炎，AST，ALT同时↑，可达正常值10-30倍，黄疸前期就已↑，有助于临床早期诊断。

　　3.AST同I 酶:

　　<黄>血清酶测定时诊断心梗的意义:

　　心肌C、肝C出现实质性损害 M-AST C-AST↑

　　M-AST↑对肝病预后有一定诊断意义

　　心梗M-AST↑ 所以M-AST越↑，心梗并发心衰的发病率、死亡率越↑，尤其推测死亡率方面意义更大。

　　4.血清乳酸脱氢酶的测定: 原理 PH对其影响

　　LDH 糖酵解酶，氧化还原反应

　　有五种同I酶LDH1-LDH5

　　一、LDH分布和特点:

　　广泛分布，主要在肾，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述组织病变，血清中LDH。主要催化以下反应:

　　L-乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+

　　PH碱 正反应(L-P)

　　PH中性 逆反应(P-L)

　　二、方法学

　　(一)比色法:P122

　　1.原理:L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+

　　PH8.8

　　丙酮酸+2.4-二硝基苯肼 → 丙酮酸-2.4-二硝基苯腙

　　酸 草黄色

　　加NaOH 棕红色

　　颜色越深，酶活力越大

　　2.参考值:225-540u/dL

　　3.注意事项:产物生成量与反应时间不成比例

　　(1)标本严禁溶血 因为RBC内LDH活力是血清内的100倍。

　　(2)LDH受重金属盐、EDTA、草酸盐的抑制。最好用血清标本

　　(3)血清标本2-6 数天，室温48h

　　(4)准确性和重复性在酶学检验中最差，因为五种同I酶与底物结合能力不同，最适反应条件不同，在病理

　　LDH组成差异大，所以很难找出LDH最适反应条件。eg:心梗LDH1↑，肝病LDH5↑

　　(5)结果>2500u/dL，将标本稀释重做。

　　(二)连续监测法(酶法):P120

　　1.原理:L-乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+

　　逆反应比正反应速度快2-3倍 所以反应偏向左侧，多用P-L

　　LDH

　　丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+

　　PH7.4

　　340nm处监测，吸光度下降幅度与LDH成正比。

　　2.参考值:240-460u/L 37℃

　　3.注意事项:

　　(1)逆反应优点:

　　a.试剂用量少，所需NAD+，只是L-P所用NADH+H+的3%，样品少

　　b.单位时间内吸光度变化大，逆反应线性范围较大，酶促反应速率比正反应快3倍，利于测定。 时间短

　　c.酶活力随时间的线性关系较长

　　(2)正反应优点:

　　a.NADH+H+比NAD+稳定，价格低，易得到纯品。

　　底物L-乳酸与逆反应底物丙酮酸稳定

　　b.L-乳酸对LDH的抑制低于丙酮酸对LDH的抑制

　　(3)连续监测法可利用正、逆反应，优于比色法。

　　(4)金属离子的存在可以降低NAD+稳定性

　　试剂中可加入EDTA，使EDTA络合金属离子，增加NAD+稳定。

　　(5)NAD+不稳定，产生对LDH有抑制作用的物质。在碱性液中比在酸性液中稳定，在Tris缓冲液中比在磷酸

　　盐缓冲液中稳定。

　　(6)某些批号的NADH+H+还有LDH的物质，使用前检查NADH+H+质量，NADH+H+溶于Tris缓冲液，分别在

　　260nm和340nm测吸光度，应2.3，说明含有在260nm处有吸收峰的杂质，如NAD+、腺苷。

　　(7)α-酮丁酸，羟基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。

　　(8)标本不能溶血

　　三、临床意义:

　　1.LDH↑:急性心梗、骨骼肌损伤、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黄疸及恶性肿瘤。

　　2.心梗:12-24h，LDH↑，48-72h达高峰，1-2W后恢复正常

　　3.恶性肿瘤晚期LDH，恶性肿瘤引起的胸腹水中LDH↑

　　4.慢性肾小球肾炎、SLE、糖尿病肾病等病人中，尿LDH可达正常人3-6倍，尿中含多种抑制LDH活性物质，如尿素，

　　小分子肽类。

　　低PH值也可抑制LDH活性。

　　5.尿毒症患者LDH正常，透析后LDH↑，因为体内尿素较高